根癌农杆菌介导的香蕉枯萎病1号生理小种遗传转化体系的优化

    Optimization of agrobacterium-mediated transformationsystem of Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 1

    • 摘要: 针对香蕉枯萎病病原菌的1号生理小种(Fusarium oxysporumf.sp cubense race 1,Foc1),以潮毒素抗性为选择标记,建立了根癌农杆菌介导的转化体系,确定影响转化效率主要因子是:YEB平板上单菌落培养时间为40h、在LB液体摇床培养中培养时间28~30 h(200 r/min)、乙酰丁香酮(AS)浓度为200 μmol/L、共培养温度为25C、IM固体培养基pH值为5.5.在此条件下,转化效率能达到150~200个转化子/106个Foc1孢子.在选择性培养基筛选转化子时,我们首次采用了直接覆盖选择性培养基方法,比传统的转膜反贴方法更方便简单.在荧光显微镜下观察到转化子的绿色荧光.潮霉素抗性测试发现转化子的抗性表现稳定.